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专业解析何为心肌酶谱检查

2009-10-09      文章来源: www.yodak.net
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心肌酶谱

对心肌酶检查,检查心肌酶主要是确定心肌缺血坏死或细胞膜通透性。

1.血清酶总论:P232

LDH、AST、CK及其同I酶,α-HBD

一、血清酶的来源和分类:

(一)根据来源及血浆中发挥作用:

1.血浆持异酶:主要在血浆中发挥催化作用的酶类


 

心肌酶谱

对心肌酶检查,检查心肌酶主要是确定心肌缺血坏死或细胞膜通透性。

1.血清酶总论:P232

LDH、AST、CK及其同I酶,α-HBD

一、血清酶的来源和分类:

(一)根据来源及血浆中发挥作用:

1.血浆持异酶:主要在血浆中发挥催化作用的酶类

eg:凝血酶原,凝血因子(X、ⅫI、Ⅶ)纤溶酶原,前激肽释放酶

假性胆碱脂酶:铜蓝蛋白,脂蛋白脂肪酶,肾素

假性胆碱脂酶:水解可能干扰乙酰胆碱脂酶活性的一些化合物

铜蓝蛋白:是一种氧化酶,与Fe蛋白,动员有关

脂蛋白脂肪酶:参与脂蛋白中脂肪的水解和储存

2.外分泌酶

eg:唾液和胰淀粉酶,胰脂肪酶,胃蛋白酶,胰蛋白酶和前列腺酸性磷酸酶等。

在血浆中很少发挥催化作用

其浓度与其分泌腺体的功能有关

3.细胞酶:存在于各细胞和组织中进行物质代谢的酶类

在血液中无重要的催化作用

(1)一般代谢酶:无器官特异性

(2)组织专一性酶:OCT、SDH、ADH主要存在于肝。其活性能较特异地反映肝cell的病变。

(二)根据酶促反应性质可将酶分为六类:

1.氧化还原酶类:催化底物进行氧化还原反应。eg:LDH

CHOCHO

C=0+NADH+H+LDHCH-OH+NAD+

COOHCOOH

丙酮酸乳酸

eg:LDH琥珀酸脱氢酶,细胞色素氧化酶,过氧化物酶

2.转移酶类:催化底物之间进行某些基团的转移或交换的酶类

COOHCH3COOHCH3

(CH2)2+HC-NH2ALT(CH2)2+C=0

C=0COOHHC-NH2COOH

COOHCOOH

α-酮戊二酸丙氨酸谷氨酸丙酮酸

eg:转氨酶、已糖激酶、磷酸化酶

3.水解酶:催化底物之间发生水解反应的酶类

eg:淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、磷酸酶

ALP

对-硝基苯酚磷酸盐对-硝基苯酚+磷酸盐

水解

4.裂解酶类:催化底物移去一个基因而留下双键的反应或逆反应的酶类。

eg:碳酸酐酶,醛缩酶

5.异构酶类:催化各种同分异构体之间互相转化的酶类

eg:磷酸已糖激酶,消旋酶

磷酸已糖激酶

6-磷酸葡萄糖6-磷酸果糖

6.合成酶类(连接酶类):催化两分子底物合成-分子的化合物,同时必须偶联有ATP磷酸键断裂。

二、血清酶的命名:

1.习惯命名法:根据酶来源,催化反应性质及底物来命名。

底物:淀粉酶,蛋白酶

性质:脱氢酶、转移酶

来源:胰淀粉酶、胃蛋白酶

底物+性质:谷草转氨酶

2.系统命名法:酶反应底物、性质均要列出,各底物间以“:”隔开

编号:(1)1为氧化还原酶类

2为转移酶类

3为水解酶类

4为裂解酶

(2)反应作用的位置,即可用于哪个基因

1.1-CH-OH

1.2-C=0

1.3-C=CH

1.4-C=NH

1.5-CH-NH2

1.6NADH、NADPH

(3)

1.1.1氯化还原酶CH-OH受体:NAD+NADP-

1.1.2氯化还原酶CH-OH受体:细胞色素

1.1.3氯化还原酶CH-OH受体:分子氧

三、血清酶的去路:

(一)血清酶的排泄:P234

1.尿路:是血清中低分子量酶类主要去路

2.胆汁不是血清酶排泄途径

(二)肝或网状内皮系统对血清酶的清除:

肝脏对以酶原形式存在的酶类有消除作用

(三)酶蛋白在血管内的失活和分解:

(四)转入其它体液

四、酶的活性单位及生理差异:

(一)酶的活性单位:在规定条件,每分钟催化1umol的基质发生转化所需要的酶量。

规定条件包括:温度、PH、缓冲系统、基质浓度及辅助因素

(二)酶的单位计算

1.根据标准计算:

(U/L)酶活力单位=A样品/A标准×C标准×Vt/Vs×1/t×1000

总体积-样品+基质

2.根据反应底物的消光系数:

酶活力=A样品/ξd×Vt/Vs×1/t×1000

消光系数比色杯厚度

(三)血清酶的生理差异:

1.性别:男>女

2.年龄:儿童磷酸酶>成人婴儿LDH2倍成人

3.进食:对酶活力本身无影响,但可影响比色时的浊度

4.活动:

5.妊娠:ALT、LDH、ALP↑

五、疾病时血清酶改变的机制:

(一)合成异常:P238

1.合成减少

2.合成增加

(二)酶从损伤细胞中释放增加:

是疾病时大多数血清酶↑的主要机制

(三)其它机制:

肾衰→尿少→血淀粉酶↑

药物,毒物可作为酶的抑制剂

2.AST的测定:

AST谷草转氨酶(GOT)

天门冬氨酸氨基移换酶

一、AST分布:

广泛分布于人体各组织、器官中,主要在心、肝、骨骼肌、肾、胰、脾、肺、RBC中。其中以心肌cell含量最丰富。

主要存在线粒体中(M-AST)。胞浆中(C-AST)仅占12%,是可溶性的正常血清中AST很少,只有上述组织发生病变

时,才释放入血。

二、方法学介绍

(一)赖氏比色法:<实验>P115

1.原理:

COOHCOOHCOOHCOOH

(CH2)2+CH2AST(CH2)2+CH2

C=OHC-NH237℃HC-NH2C=0

COOHCOOHCOOHCOOH

酮戊二酸天门冬氨酸谷氨酸草酰乙酸

COOHCH3

CH2柠檬酸苯胺C=0+CO2

C=0脱羧COOH

COOH

丙酮酸

CH3

C=0+→丙酮酸-2.4-=+H2O

COOH硝基苯腙

2.4-二硝基苯肼酸性,草黄色,加碱,棕红色

与标准浓度丙酮酸生成的苯腙比色(505nm)

2.正常参考值:8-28u

3.注意事项

(1)溶血标本不能用于AST测定,因为RBC中AST是血清10倍。

(2)M-AST、C-AST理化性质,Ag性均不同,由不同基因控制,但催化相同反应,是同I酶

(3)赖氏比色法简易性,相对准确性,所以是普及的原因

(4)难以确定在酶反应期内,产物的生成与时间成正比。

草酰乙酸是AST竞争抑制剂,随反应进程,产物,酶反应不断。

(5)显色反应及底物浓度问题。

酮戊二酸也可与2.4-二硝基苯肼反应,产生另一棕色苯腙,使AST测定假阳性增高。

为了减少其干扰,波长选在490-530nm,此时丙酮酸为-酮戊二酸2倍

2.4-二硝基苯肼在碱性溶液中也可呈色,使吸光度伪性增高。

(6)A、偶联转氨作用:

ALT

丙酮酸+谷氨酸丙氨酸

所以肝疾病AST、ALT同时,使丙酮酸消耗,AST测定结果减低。

B、产物旁路

乳酸

LDH↑NADH+H+

丙酮酸

α-酮戊二酸+天门冬aaAST草酰乙酸+谷aa.

↓MDH+NADH+H+

苹果酸

所以受LDH、MDH干扰,使AST测定结果减低

(二)酶偶联一些外连续监测法:

1.原理:L-天门冬aa.+α-酮戊二酸AST草酰乙酸+谷aa.

草酰乙酸+NADH+H+MDHL-苹果酸+NAD+

340nm

吸光度下降值,计算AST活力

2.参考值:男<40u/L37℃

女<35u/L37℃

3.注意事项:

(1)采血后立即分离血清,避血溶血

血清与血块不可长时间设置在一起

(2)血清,室温4-8h,2-6℃7d-20℃8月活力不变

(3)抗凝剂血浆:

EDTA、2Na,肝素对AST无抑制作用

不能用草酸盐抗凝剂,因为可抑制AST活性

(4)AST浓度过高,稀释重做。

(5)不存在偶联转氨作用和产物旁路问题

(6)不存在酮戊二酸干扰,可适当提高底物浓度使反应

(7)底物中存在谷氨酸脱氢酶(GLDH)

α-酮戊二酸+NADH+H++NH3GLDH谷aa.+NAD++H2O

消耗NADH+H+,使结果伪性增高。

(8)轿清中丙酮酸LDH

丙酮酸+NADH+H+LDH乳酸+HAD+

消耗NDAH+H+,使结果偏高

(9)在指示酶作用有,草酰乙酸可自动脱羧生成丙酮酸,使结果偏低。应加LDH,使之成为乳酸,从而更加准

确反映AST活力。

所以MDH、LDH共同作为指示酶

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